Escobaria cubensis, comúnmente denominado “cactus enano de Holguín” es un cactus endémico de la provincia de Holguín, que se encuentra amenazado por la actividad antrópica. Este es el objeto de la presente investigación y se hace con el fin de establecer la metodología para la propagación in vitro de Escobaria cubensis (Britton & Rose) Hunts, a través de la inducción de brotes vía organogénesis a partir de plántulas germinadas in vitro y de areolas, provenientes de mamilas. Se emplearon semillas colectadas en la localidad de Purnio, en el municipio de Holguín. Se logró una desinfección de las semillas botánicas con hipoclorito de sodio (2%) en inmersión doble durante cinco minutos, y de las areolas durante cinco minutos en bicloruro de mercurio (0.2%). Así como su posterior siembra en medio de cultivo MS suplementado con sacarosa (30 g.L-1). Se obtuvo un 95.64% de germinación en medio de cultivo MS (25%), se logró además un 66.67% de supervivencia en las mamilas. En la multiplicación se evaluó diferentes concentraciones de Benzilaminopurina y se determinó que el mejor resultado, con 5.1 brotes por explante, fue el medio que contenía 13.3 μM Benzilaminopurina + 5.4 μM ácido naftalenacético. A partir del cuarto subcultivo, el número de brotes por explante disminuye. En la fase de enrizamiento se empleó el medio basal MS con 8.1 μM ácido naftalenacético + 2.5 μM ácido indolbutírico, obteniendo como promedio 2.5 raíces por planta de cultivo; en la aclimatización se empleó el sustrato Zeolita + Lecho de Bambú + Suelo y se obtuvo un 93.5% de supervivencia